24．DNA抽出

[目的］DNAを抽出して観察する。抽出したDNAを確認する。
［材料・薬品・器具］
　魚の白子　食塩水　エタノール　SDS溶液（界面活性剤　ラウリル硫酸ナトリウム）
おろし金　ガーゼ　酢酸オルセイン溶液
［準備および操作］
A．DNAの抽出・精製
１)冷凍した白子をすりおろす。
２)食塩水にSDS溶液を溶かしたものを加え、攪拌し、ガーゼでろ過する。（タンパク質と核酸を分離）
３)ろ液を100℃で5分間湯煎する。
　　（タンパク質の熱変性）
４)冷却後、重ねたガーゼでろ過する。
５)ろ液をよく冷やし、エタノールを静かに加える。
６)ろ液とエタノールの境界面にできる白い沈殿をつまみ取り、別のビーカーに入れ、食塩水を加えてよく溶かす。
７)再び湯煎し、ろ過する。（精製）
８)ろ液を冷却し、エタノールを加える。
９)ろ液とエタノールの境界面に白雲のような沈殿が生じる。ゆっくりと取り出す。（抽出）
　
　
　
　　
B．DNAの確認
１)DNAを少量の食塩水に溶かし、ろ紙に文字を書く。
２)酢酸オルセイン溶液を文字の上にたらす。
３)ろ紙ごと熱湯につけ脱色すると、DNAが赤く染まり確認できる。
　
　
[留意点・工夫点]
＊牛のレバー、鶏のレバー、たまねぎ、ブロッコリー、などを冷凍して使うとよい。
＊材料・薬品・器具はすべてよく冷やして使用する。
＊ろ過する際、ろ紙のかわりに三角コーナー用不織布を使うとよい。
＊試料を多くする、ガーゼでしっかりと搾る、など純度より収量を多くすることを念頭において実験するとよい。
＊SDS溶液が無いときは台所用洗剤を数滴加えてもよい。レバーの場合は何も加えなくてもよい。
＊操作２のとき、ろ過前の試料がプリプリしたゲル状であることを確認する。
＊1〜２mol/lの食塩水がDNAを良く溶かすので食塩水濃度は１mol/lより下がらないように気をつける。
＊最後のエタノール沈殿の際はできるだけ静かに混ぜる。
＊精製のため食塩水に溶かすときには、エタノールが残っているとうまく溶けない。
＊染色液は酢酸オルセインの他に酢酸カーミン、エオシンY、メチルグリーン・ピロニン、シッフの試薬が用いられることもある。
＊遠心分離器・クロロホルムを用いても簡単にDNAを抽出できるが、高度な機材を用いたり、危険な有機溶剤を使用しなければならない。
＊材料により操作が多少異なっており、また実験書によっても操作が異なっているので、自分で試してみて良い方法を探ることが望ましい。